EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans細胞轉染試劑（低毒）/低毒細胞轉染試劑

轉染(ran)試劑產品(pin)描(miao)述(shu)

EZ Trans細胞轉染(ran)試劑(ji)（低毒），作為新一代的(de)轉染(ran)試劑(ji)，其轉染(ran)原理(li)是帶(dai)正電的(de)陽離子聚合物與核酸中帶(dai)(dai)負電(dian)的(de)磷酸基團形成帶(dai)(dai)正電(dian)的(de)復合物后與細胞(bao)表面(mian)帶(dai)(dai)負電(dian)的(de)蛋白多糖相(xiang)互作用，并通(tong)過胞(bao)吞作用進入細胞(bao)。

本(ben)產品經過李記生物的優化處理，具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適用范圍廣等特點。

以下(xia)為低毒(du)轉染(ran)試劑說(shuo)明書，其他產(chan)品(pin)詳情請問銷售(shou)人員(yuan)。

細胞轉染(ran)試劑與慢病毒訂(ding)購信息(xi)

轉染試劑運(yun)輸與保存

藍冰運(yun)輸。4℃保存(cun)，有效期12個月(yue)。【注(zhu)】：不可冷凍！

轉染試劑使用方(fang)法(fa)（以 24 孔板(ban)為例，其(qi)他培養皿中轉染請參考(kao)表1）

1. 接種細(xi)胞

對于(yu)貼壁細胞，轉染前18-24 h進行(xing)鋪板（不含抗生素），使其在(zai)轉染時的密度(du)大(da)約(yue)在(zai)80%左右。對于懸浮細胞，轉(zhuan)染當天，配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板，每500 µL生長培(pei)養(yang)基中加(jia)入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yang)液中(zhong)的血清(qing)不影(ying)響轉(zhuan)染(ran)效率。轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑使用(yong)(yong)量受細胞類(lei)型及其他實驗條件影(ying)響，建議初次使用(yong)(yong)時設置梯度(du)進行優(you)化(hua)最佳使用(yong)(yong)量。

2. 準備EZ Trans-DNA復合物

（1）對(dui)于每孔(kong)細胞，將1 μg質粒DNA稀釋到(dao)40 μL無血(xue)清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培(pei)養(yang)基），混(hun)勻(yun)。

（2）對于每(mei)孔細胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuan)染試劑稀釋(shi)到40 μL無血清的高糖(tang)DMEM培養(yang)基（或(huo)者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yang)基），輕(qing)輕(qing)混勻(yun)。

【注】：無(wu)血清的高糖(tang)DMEM培養基是(shi)稀釋(shi)液，不(bu)能使用含血(xue)清的培養基進行DNA和(he)EZ Trans轉染試劑的稀釋(shi)。因為EZ Trans-DNA轉(zhuan)染(ran)復合物的形成過程不能含(han)有血(xue)清。

（3）將稀(xi)釋好的(de)EZ Trans轉染(ran)試劑盡(jin)快全部加入到(dao)已稀釋好的質粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進(jin)行。

（4）室(shi)溫(wen)放置10-15 min，以(yi)形成EZ Trans-DNA復合物。

3. 轉(zhuan)染細(xi)胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合(he)物(wu)均勻滴入到含細胞(bao)的培養皿中(zhong)。輕(qing)輕(qing)晃動培養皿或輕(qing)微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合(he)物(wu)分散均勻。

（2）在(zai)37℃，5% CO₂培養箱培養6-18 h，去(qu)除(chu)含EZ Trans-DNA復合(he)物的培養(yang)液(ye)，更換新的培養(yang)液(ye)，繼續培養(yang)至(zhi)對轉入基因表達(da)分析(xi)。

【注】：篩(shai)選穩定轉染細胞株，轉染細胞24 h后(hou)，將(jiang)細胞(bao)傳代至(zhi)新鮮的生長培養基中（將(jiang)細胞(bao)稀(xi)釋10倍(bei)以上），在(zai)37℃，5% CO2培養(yang)箱(xiang)中孵育24 h，加入篩(shai)(shai)選培養(yang)基。在(zai)有轉染抗性基因(yin)相匹配的藥物篩(shai)(shai)選條件下，約 1～2周可篩(shai)(shai)選到(dao)耐藥性克隆，在(zai)這期(qi)間需經常更換含篩(shai)(shai)選藥物的生(sheng)長(chang)培養(yang)基。

公司簡介

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