簡要描述:EZ Trans細胞(bao)(bao)轉染(ran)(ran)試(shi)劑(Ⅱ)使用(yong)新型陽離子聚合物,在保(bao)留傳統陽離子聚合物優(you)點同時,有兩個重要改進,一是顯(xian)著降(jiang)低了轉染(ran)(ran)試(shi)劑的(de)細胞(bao)(bao)毒性;二是顯(xian)著提高轉染(ran)(ran)效(xiao)率(lv),細胞(bao)(bao)的(de)適用(yong)范圍(wei)更廣。經比對試(shi)驗,在選用(yong)的(de)測試(shi)細胞(bao)(bao)中,轉染(ran)(ran)效(xiao)率(lv)、細胞(bao)(bao)毒性均優(you)于大(da)部(bu)分市(shi)售轉染(ran)(ran)試(shi)劑產品,接近或(huo)超(chao)過Lipo3000。
產品分類
Product Category詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC04L011 |
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規格 | 1mL | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 細胞轉染 | 應用領域 | 化工,生物產業,綜合 |
產品描述
EZ Trans細(xi)胞(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑Ⅱ,作(zuo)(zuo)為新一代的轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑,其轉(zhuan)(zhuan)染(ran)原理是(shi)帶(dai)(dai)正電的聚合(he)物與(yu)核酸分(fen)子(zi)的帶(dai)(dai)負(fu)電的磷(lin)酸基團形(xing)成帶(dai)(dai)正電的復(fu)(fu)合(he)物后,與(yu)細(xi)胞(bao)表面帶(dai)(dai)負(fu)電的蛋白多糖相互作(zuo)(zuo)用,并通過胞(bao)吞作(zuo)(zuo)用進入細(xi)胞(bao)。該產(chan)品(pin)經過本公(gong)司的優化處理,具有轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效率高,細(xi)胞(bao)毒性低(di),操作(zuo)(zuo)簡單,重(zhong)復(fu)(fu)性好,適用范圍(wei)廣等特點(dian)。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
EZ Trans細胞轉染試劑(Ⅱ) | AC04L011 | 1 mL | 690 |
保存方法
冰袋運輸,4℃保存,保質期12個月。不可冷凍!
使用方法
(以 24 孔板為例,其他培養皿中轉染請參考表1)
1. 接種細胞
對于貼壁細胞,轉染前18-24 h進行鋪板(不含抗生素),使其在轉染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞,轉染當天,在配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板,每500 µL生長培養基中加入4~8×105cells。
【注】:培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響,建議初次使用時設置梯度進行優化合適的使用量。
2. 準備EZ Trans-DNA復合物
(1)對于每孔細胞,將1 μg 質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基(或OPTI-MEM I 培養基),混勻。
(2)對于每孔細胞,將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基(或者OPTI-MEM I 培養基),輕輕混勻。
【注】:無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液,不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。
(3)將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒DNA中,輕輕混勻。
【注】:此混合的順序不能反向進行。
(4)室溫放置10-15 min,以形成EZ Trans-DNA復合物。
3. 轉染細胞
(1)將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微振蕩,讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。
(2)在37℃,5% CO2培養箱培養6-18 h,去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液,更換新的培養液,繼續培養至對轉入基因表達分析。
【注】:篩選穩定轉染細胞株,轉染細胞24 h后,將細胞傳代至新鮮的生長培養基中(將細胞稀釋10倍以上),在37℃,5% CO2培養箱中孵育24 h,加入篩選培養基。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下,約 1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。
注意事項
1.質粒質量:請務必使用高純度無內毒素轉染級質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度,260 nm / 280 nm比值(zhi)(zhi)確定DNA純(chun)度(du)(比值(zhi)(zhi)應(ying)該在1.8~2.0的范圍之內)。如(ru)有可能(neng),請(qing)通過(guo)瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒(li)的完整(zheng)性(xing)。
2. 細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。
3. 細胞培養液要求:EZ Trans細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染,并且轉染前不需要換培養基。但是,制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑,因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養液中不添加抗生素。
4. 試劑用量的優化:DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響,初次使用應優化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1~4 μL 體積EZ Trans細胞轉染試劑進行優化。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
培(pei)養(yang)器(qi)皿 | 培養液體積(mL) | DNA量(liang)(μg) | EZ Trans (μL) | 稀釋液(μL) |
48孔板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
24孔板(ban) | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
12孔(kong)板(ban) | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
6孔板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
35 mm培養皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
60 mm 培(pei)養皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
100 mm 培養(yang)皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
【注】:該表使用量僅供參考,具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA(μg): EZ Trans細胞轉染試劑(μL)比值保持在1:2~1:5。
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